神戸大学附属図書館デジタルアーカイブ
https://hdl.handle.net/20.500.14094/E0027167

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メタデータID
E0027167
アクセス権
metadata only access
出版タイプ
Not Applicable (or Unknown)
タイトル
塩基性線維芽細胞成長因子(Basic Fibroblast Growth Factor : bFGF)過剰GH_3細胞の樹立とその株における形態および内分泌機能上の変化
エンキセイ センイガ サイボウ セイチョウ インシ (Basic Fibroblast Growth Factor : bFGF) カジョウ ハツゲン GH_3 サイボウ ノ ジュリツ ト ソノ カブ ニオケル ケイタイ オヨビ ナイブンピツ キノウジョウ ノ ヘンカ
著者
著者名
林, 聡子
ハヤシ, サトコ
所属機関名
神戸大学医学部
言語
Japanese (日本語)
収録物名
神戸大学医学部紀要
Medical journal of Kobe University
巻(号)
55(1)
ページ
1-10
刊行日
1994-12
抄録
Basic fibroblast growth factor (bFGF) は,強力なmitogenic作用を持ち,また近年bFGFが様々な腫瘍において腫瘍増殖に関与することが報告されている。今回bFGFのrat下垂体腫瘍細胞GH_3に及ぼすbFGFの効果を検討する目的でbFGF過剰発現GH_3細胞株の樹立を試みた。発現ベクター(pCD-SRα)に組み込んだrat bFGF cDNAをネオマイシン耐性遺伝子(pSV2 neo)と共にelectroporation法によりGH_3にco-transfectした。G418でネオマイシン耐性クローンを選別し,各クローンより抽出したgenomic DNAでSouthern解析を行ったところ4クローンに外因性bFGFcDNAに一致する陽性バンドが検出された。bFGFのモノクローナル抗体をEuropiumで標識し固相に2抗体を用いた3抗体によるImmunofluorometric assayにて細胞中のbFGF含量を測定した。GH_3細胞およびbFGF導入遺伝子を認めないネオマイシン耐性GH_3細胞では細胞中のbFGF量は感度下限であったのに対しbFGF陽性GH_3細胞ではbFGF含量は7.2ng/mg proteinと過剰に発現していることが確認された。bFGF過剰発現GH_3細胞株を培養するとGH_3細胞のように単層は形成せず島状に発育する傾向が認められた。またbFGF発現株ではbFGF発現量に応じてTRH刺激後のPRL分泌量が増大し,一方SRIFによるGH分泌抑制においては感受性が増大していた。またラットにGH_3細胞, bFGF過剰発現細胞を移植したところ,間質の拡大や血管増生の形態変化が認められた。今回恒久的にbFGFを過剰に発現するGH_3細胞を樹立し, bFGF過剰発現を認めないGH_3細胞と比較した結果, bFGFがGH_3細胞においての形態変化やホルモン分泌能に影響を与えることが示唆された。
Basic fibroblast growth factor (bFGF) is a potent mitogen for various cells. In order to clarify the role of bFGF in the pituitary tumor cell functions, rat bFGF cDNA was fused to the promoter SR α, consisting of the early promoter of SV40 and HTLV (I)-LTR, and cotransfected with pSV2-neo to GH_3 cells by an electroporation method. After selection by G418, we obtained 7 neomycin resistant clones. Southern blot analysis of genomic DNA revealed the presence of transfected rat bFGF cDNA in 4 of 7 clones. We also established the immunofluorometric assay system for bFGF measurement using 3 monoclonal antibodies against different portions of human bFGF, which gave minimum detectable quantity of 10 pg
ml and cross-reacted neither with acidic FGF nor IGF-I within 100ng
ml. Though bFGF was undetectable in culture medium of any clones, cell contents of bFGF was 7.2ng/mg protein in 1 of 4 bFGF-transfected clones (GH_3FGF (+) ), whereas bFGF contents of parent GH_3 cells and the control cells transfecting only with pSV2-neo but not with bFGF cDNA (GH_3FGF (-)) were below 5.2pg/mg protein. GH_3FGF (+) grew as adherent cells and formed epithelial sheets. The amounts of PRL release by TRH was greater in GH_3FGF (+) than that in GH_3 or GH_3FGF (-). On the other hand, the sensitivity to SRIF was increased in Gfj:sFGF (+) compared with that in other clones. Transplantation of GH_3FGF (+) as well as GH_3 cells to Wister/Furth female rats resulted in the formation of tumor mass, which contained the enlarged capillary arteries and wider interstitium in GH_3 FGF (+ )-transplants than in GH_3. In this study we established for the first time the GH_3 cell clones overexpressing bFGF, and found the unique morphological and endocrinological changes in these cells probably attributable to overexpressed bFGF.
キーワード
GH_3細胞
下垂体腫瘍
遺伝子移入
bFGF
カテゴリ
紀要論文