神戸大学附属図書館デジタルアーカイブ
https://hdl.handle.net/20.500.14094/E0028395

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メタデータID
E0028395
アクセス権
metadata only access
出版タイプ
Not Applicable (or Unknown)
タイトル
Insulin-degrading enzyme の内因性阻害物質の精製に関する研究
Insulin-degrading enzyme ノ ナイインセイ ソガイ ブッシツ ノ セイセイ ニカンスル ケンキュウ
その他のタイトル
Affinity purification of an endogenous inhibitor of insulin-degrading enzyme
著者
著者名
小川, 渉
Ogawa, Wataru
オガワ, ワタル
所属機関名
神戸大学医学部内科学第二講座
言語
Japanese (日本語)
収録物名
神戸大学医学部紀要
Medical journal of Kobe University
巻(号)
51(4)
ページ
149-157
刊行日
1990-12
抄録
現在までの数多くの報告によりInsulin-degrading enzyme (IDE)の細胞内インスリン代謝における生理的重要性が注目されているが,その活性調節機構についてはいまだ明らかではない。IDEの活性調節機構を検討するため,酵素とその阻害物質の特異的結合を利用したアフィニティ精製法を用いて,IDEの内因性阻害物質の精製を試みた。IDEに対する特異的単クローン性抗体をカップリングしたカラムにラット肝可溶性分画をapplyすると,そのインスリン分解活性の97%以上がカラムに結合した。このカラムに肝可溶性分画を熱処理し,硫安分画を行った後にapplyすると,約5%のインスリン分解限害活性がカラムに結合した。高pHのbufferにてカラムからIDEと阻害物質は同時に溶出され,その後,イオン交換,ゲル濾過の2種のクロマトグラフィーにて内因性阻害物質を精製した。最終精製産物はSDS.PAGE上14Kdの単一bandを示した。その阻害形式は競合型であり,インスリンとIDEとのcross-linkingをも阻害した。高度に精製されたIDEとその内因性阻害物質は細胞内インスリン代謝機構の解明に有用であると考えられる。
The role of Insulin-degrading enzyme (IDE) in insulin degradation has been well documented. However, the precise characteristics and regulatory mechanism of the enzyme still remain obscure. To elucidate the regulatory mechanism of this enzyme, in this study, the author attempted to purify an endogenous inhibitor of IDE using mono clonal antibody (9B12). When cytosolic fraction of rat liver was applied to an 9B12-coupled Affi-gel 10 column, more than 97% of insulin degrading activity was absorbed. Heat treated cytosolic fraction was re-applied to the colum after ammonium sulfate fractionation, we observed 5% of inhibitory activity was absorbed to the column which IDE had been bound in advance. With high pH (pH 11), IDE and its inhibitor were eluted from the column concomitantly. The inhibitor was further purified via 2 steps of chromatography. The final sample showed 14 Kd single band on SDS. PAGE; Lineweaver-Burk analysis suggested that it inhibited insulin in conpetetive manner and inhibiting the cross-linking of <125>^I-insulin to IDE. Highly purified IDE and its inhibitor can help clarify the cellular metabolism of insulin.
キーワード
内因性限害物質
アフィニティー精製
単クローン性抗体
Insulin-degrading enzyme
カテゴリ
紀要論文