神戸大学附属図書館デジタルアーカイブ
https://hdl.handle.net/20.500.14094/E0029173

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メタデータID
E0029173
アクセス権
metadata only access
出版タイプ
Not Applicable (or Unknown)
タイトル
単クローン性抗体を用いたインスリン分解酵素の組織分布と細胞内局在に関する研究
タンクローンセイ コウタイ オ モチイタ インスリン ブンカイ コウソ ノ ソシキ ブンプ ト サイボウナイ キョクザイ ニカンスル ケンキュウ
その他のタイトル
Tissue distribution and cellular localization of insulin-degrading enzyme in rat liver with monoclonal antibodies
著者
著者名
秋山, 裕之
Akiyama, Hiroyuki
アキヤマ, ヒロユキ
所属機関名
神戸大学医学部内科学第二講座
言語
Japanese (日本語)
収録物名
神戸大学医学部紀要
Medical journal of Kobe University
巻(号)
49(3)
ページ
97-108
刊行日
1988-09
抄録
我々はインスリンの生体内代謝機構にインスリンに対して高い親和性を有する蛋自分解酵素であるInsulin-degrading enzyme (IDE)の重要性を報告してきた。今回,IDEに特異的な単クローン性抗体を用いてIDEの組織分布におよび細胞内局在について検索した。その結果、1. サンドイッチ法によるRIA系を用いてIDEのラット組織分布を検討したところ,肝,腎,脳,骨格筋の全てにIDEの存在が認められた。また,IDEは肝に最も多量に存在することが示された。2. RIA法によるIDE量と従来のトリクロロ酢酸を用いた沈澱法(TCA法)で得られたインスリン分解活性の比較では,肝を100%とした場合,脳,骨格筋では83-117%とほぼ同等であったが,腎では約2倍であり,インスリン分解活性がそのままIDE量を反映し得ないことが示唆された。3. 酵素抗体法による免疫光顕でのラット肝IDE免疫反応性は肝静脈よりも門脈周辺の肝細胞に強く,また,胆管上皮にもIDEの存在が認められた。4. 免疫電顕では,IDE免疫反応性は粗面小胞体周可辺の細胞質に存在し,細胞膜,核,ミトコンドリアには認められなかった。5. Immunoblotting法およびRIA法の結果からも同様に,IDEが細胞質可溶性分画に存在することが示唆された。
Insulin-degrading enzyme (IDE) has been implicated in the degradation of insulin, since microinjection of specific monoclonal antibodies to this enzyme into the cytoplasm inhibits insulin degradation and IDE can cross-link to [<125>^I] insulin in the intact cell. Although this suggests that IDE interacts with insulin during intracellular processing of the hormones, and although IDE has been purified mostly from the cytosolic fraction of various tissues, the tissue distribution and cellular localization of IDE are still controversial. We aimed to clarify the localization of tissue IDE in the rat with two monoclonal antibodies and a sandwich radioimmunoassay. IDE was detectable in liver>kidney>brain>muscle. The ratio of insulin-degrading activity was roughly the same in liver, brain and muscle, but twice as high in the kidney. Then we looked for IDE within cells. Immunohistochemical staining of rat liver with IDE antibodies revealed it mostly in parenchymal cells, especially near the portal tract and the bile duct epithelium. The electron microscope disclosed IDE immunoreactivity in the cytoplasm near the rough endoplasmic reticulum but not in the plasma membrane, nucleus, or mitochondria. Immunoblotting prepared rat liver showed that IDE reacts with a single peptide in the cytosolic fraction of an apparent Mr of 110,000, consistent with the Mr of IDE. However, no polypeptide band corresponding IDE detected in the plasma membrane, mitochondria, or lysosomes. Finally, using RIA, we were only able to detect IDE in the cytosolic fraction. This all suggests that IDE is cytosolic.
キーワード
インスリン代謝インスリン分解酵素
インスリン作用
ラジオイムノアッセイ
免疫組織化学
カテゴリ
紀要論文